为了进一步证实黄芩甙及其铜锌络合物对过氧亚硝基的抗氧化性的抑制作用,我们研究了黄芩甙及其铜锌络合物对氧亚硝基氧化二甲基亚砜产生的甲基自由基的清除作用。过氧亚硝基氧化二甲基亚砜产生的甲基自由基用0.1mol/L tNB捕捉,产生甲基-tNB自旋加合物的12条特征谱图。在过氧亚硝基和二甲基亚砜体系加入黄芩甙及其铜锌络合物可明显清除产生的甲基自由基和抑制过氧亚硝基的氧化作用。黄芩甙对过氧亚硝基氧化二甲基亚砜产生的甲基自由基几乎没有清除作用,黄芩甙锌有一定清除作用,黄芩甙铜的清除作用最强。但随着时间的延长,它们作用的动力学是不同的,在对照组,甲基自由基的产量随时间逐渐增大,在20分钟达到顶峰,然后逐渐下降;黄芩甙的加入首先是加速甲基自由基的产生,在2分钟内就使甲基自由基产量达到顶峰,而且在这一段时间内,甲基产量高于对照组;然后迅速下降,在很短时间内使甲基自由基产量远远低于对照组;然后迅速下降,在很短时间内使甲基自由基产量远远低于对照组。黄芩甙锌的加入在6分钟内使甲基自由的产量达到最高峰,其峰值和加入黄芩甙相同,然后很快下降,其达到顶峰的时间比黄芩甙晚,下降也慢一些,即使在最高峰时也没有高于对照组;加入黄芩甙铜使甲基自由基的产生在15分钟达到顶峰,明显晚于黄芩甙和黄芩甙锌,其峰值与加入黄芩甙或加入黄芩甙锌相同,然后逐渐下降,下降速度也明显慢于黄芩甙和黄芩甙锌。
过氧亚硝基和对红蛋白有很强的氧化性。过氧亚硝基的氧化性有两种不同机理,一种认为过氧亚硝基是通过分解成羟基和二氧化氮自由基发挥其氧化作用的;另一种机理认为过氧亚硝基不需分解成羟基和二氧化氮自由基,而是通过构象变化转化为氧化性更强的形式。
从黄芩甙及其铜锌络合物对过氧亚硝基氧化引起损伤的保护作用可以看出,过氧亚硝基对血红蛋白的氧化可能不是通过分解成羟基和二氧化氮自由基来实现的,因为黄芩甙和黄芩甙锌的保护作用很弱,而黄芩甙铜的保护作用很强。前一节结果表明,黄芩甙铜对羟基自由基的清除能力很弱,和这一节的结果结合起来,可以推论过氧亚硝基不是通过分解成羟基自由基起作用的。过氧化氢酶的加入也不能抑制过氧亚硝基的氧化作用,也证明了以上推论,过氧亚硝基可能是通过异构方式夺取氧合血红蛋白的电子的。